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BD CBA流式液相多重蛋白定量技術

點擊次數:26  更新時間:2025-03-14

在生物醫學研究中,液相蛋白定量檢測是不·可或·缺的環節。然而,傳統檢測技術大多只能針對單一指標進行分析,若需同時檢測多個指標,則需大量樣本分批檢測,操作繁瑣且各指標間差異較大。對于樣本量較少或需對比各指標的研究者而言,傳統技術難以滿足需求。例如,在細胞培養上清或血清中,細胞因子含量較低,常低于常規檢測方法的下限,使用Western Blot等常規蛋白檢測方法難以奏效。為此,BD-Pharmingen公司開發了一種基于流式細胞儀的液相蛋白定量技術——CBA(Cytometric Bead Array,細胞因子微球檢測技術),為這一難題提供了有效解決方案。

CBA技術原理CBA是一種基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法,可同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。BD公司借助流式細胞儀對熒光信號具有級數放大的特性,將待測的可溶性因子附著于近似細胞直徑的微粒上,從而實現對樣品中多種可溶性因子的檢測。其基本原理與ELISA相似,通過微小、分散的顆粒捕獲液體待測物,并利用流式細胞儀檢測類似“三明治"結構的顆?!郎y物復合體所散發的熒光,進而測定待測物的數量。

在CBA檢測過程中,每個微球大小一致,帶有特定熒光強度,并包被有特異性捕獲抗體,為待測物提供類似ELISA孔板的捕獲表面。當微球與待測樣品溶液混合后,微球上的特異性抗體與樣品中的相應抗原或蛋白結合,隨后加入熒光標記的檢測抗體,形成“三明治"夾心復合物。通過流式細胞儀,CBA可對特異性目的蛋白進行檢測。每種微球攜帶不同強度的紅色熒光,通過流式細胞儀的FL3通道檢測微球熒光強度差異實現目的蛋白的定性;檢測抗體帶有PE熒光素標記,在FL2通道檢測,通過檢測抗體的PE熒光強度實現目的蛋白的定量。

CBA技術特點CBA融合了ELISA和細胞流式技術的優點,是一種先進的液相蛋白檢測技術。與ELISA相比,CBA的捕獲微球呈懸浮態,能更高效地捕獲被分析物;同時,它還具備流式細胞儀寬范圍熒光檢測的特點,對樣本需求量少,檢測快速且準確。以下是CBA的主要技術特點:

1.多重檢測能力CBA最多可同時對一個樣本中的75個目的蛋白進行定量,大大提高了檢測效率,滿足了復雜樣本分析的需求。

2.樣本需求量少:僅需50μL溶液即可進行一次檢測,這對于樣本量有限的研究具有重要意義,減少了樣本采集的困難和成本。

3.高靈敏度、寬檢測范圍和良好重復性:CBA的分析靈敏度高達2.8pg/mL,檢測范圍可達0-5000pg/ml,所有分析只需一組標準曲線。這種技術通過抗體的熒光強度對目的蛋白定量,避免了ELISA中酶聯放大可能產生的假陽性結果,提高了檢測的準確性和可靠性。

4.靈活的檢測對象組合:傳統的CBA試劑盒通常包含固定的6個指標,形式較為固定。為了滿足不同客戶的實際需求和研究興趣,BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set。這一創新改變了傳統CBA試劑盒的固定形式,使其成為自由組合、靈活搭配的“自助餐"。研究者可以根據需要組合不同的捕獲微球來檢測多個指標,最多能同時檢測75個指標。除了繼承CBA試劑盒的優勢外,CBA Flex Set還配備了獨立的軟件分析系統(CBA Flex Set Analysis Software),并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進行操作。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間,進一步豐富了CBA產品線,涵蓋了免疫、細胞信號傳導、細胞凋亡等多個領域的蛋白定量分析。

5.操作簡便,省時省力:CBA技術采用芯片式集成測定,所有檢測只需一組標準曲線即可計算出每種待測蛋白的濃度。操作流程簡單,整個檢測過程僅需3.5小時,可對樣本進行實時分析,顯著縮短了檢測時間,提高了檢測效率,使研究人員能夠更快速地獲得實驗結果,加速研究進程。

總之,CBA技術以其多重檢測能力、低樣本需求、高靈敏度、寬檢測范圍、良好重復性、靈活的檢測對象組合以及簡便的操作流程等優勢,為液相蛋白定量檢測領域帶來了革新,為生物醫學研究提供了強大的技術支持。

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產品應用
自CBA上市以來,越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應用于他們的領域。CBA應用領域涉及眼淚、血清、唾液、細胞培養上清等樣本中細胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細胞信號傳導中磷酸化蛋白、凋亡相關蛋白分析,系統性紅斑狼瘡(SLE)和新生兒膿血癥等免疫疾病的監控,腫瘤研究,藥物對病人的治療效果評估,藥物研發,疫苗研究,總體免疫功能分析等多領域。

CBA產品信息見下表:

Cat.#產品描述試劑盒檢測指標
557800Non-human Primate Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-6,TNF, IFN-γ
560485Mouse Th1/Th2/Th17 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, TNF, IL-17A, IL-10
551287Mouse Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ,TNF
552364Mouse Inflammation KitIL-6, IL-10, MCP-1, IFN-γ, TNF, IL-12p70
550026Mouse Immunoglobulin Isotyping KitHeavy and light chain isotypes of mouse IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgA, IgM, and IgE
560484Human Th1/Th2/Th17 KitIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-γ, IL-17A
550749Human Th1/Th2 Cytokine KitIL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF, IFN-g
551809Human Th1/Th2 Cytokine Kit IIIL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF, IFN-g
551811Human Inflammatory Cytokine KitIL-8, IL-1β, IL-6, IL-10, TNF, IL-12p70
552990Human Chemokine KitIL-8, RANTES, MIG, MCP-1, IP-10
561418Human Anaphylatoxin KitC3A,C4A,C
















2 現有CBA Flex Set產品



Phospho Akt1(S473)Phospho Akt2(S474)
Phospho BLNK (Y84)Phospho p120 Catenin(Y228)
Phospho Btk (Y551)Phospho MEK1/2(S222)
Phospho eNOS (S1177)Phospho Paxillin(Y118)
Phospho ERK1/2 (T202/Y204)Phospho Pyk2(Y402)
Phospho Itk (Y511)Phospho SLP-76(Y145)
Phospho JNK1/2 (T183/Y185)Phospho c-jun(S63)
Phospho p38 (T180/Y182)Phospho stat3
Phospho PLC? (Y783)
Phospho Rsk (T573)
Phospho Stat1 (Y701)
Phospho Syk (Y352)
Phospho ZAP70 (Y319)Human Rex-1 Flex Set
Total Stat1Human Oct-4 Flex Set
Total SykHuman Nanog Flex Set
Total ZAP70


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